脱毒治疗:倒提壶药材质量标准--《新疆医科大学学报》--医学期刊频道--首席医学网

【关键词】  倒提壶; 质量标准; 薄层色谱

　Research on quality specification of Herb Cynolgossum officinale

　　LI Wei， ZHAO Feicui

　　(Department of Pharmaceutical Sciences, Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital，

　　Xinjiang Medical University，Urumqi 830000， China)

　　Abstract： ObjectiveTo provide scientific basis for the utilization and development of Cynolgossum officinale by setting up the quality control specification of Cynolgossum officinale. MethodsThere are 5 different origin batchs of Cynolgossum officinales, after identificating and describing the properties, making contrast to β-Sitosterol on TLC according to Chinese Pharmacopoeia 2010 version (Vol Ⅰ) of appendix Ⅵ B; we made determination for the moisture, total ash and acid-insoluble ash of the 5 batches Cynolgossum officinales according to Chinese Pharmacopoeia 2010 version (Vol Ⅰ) of appendix Ⅸ H and K, then the ethanol-soluble extract determination method of Cynolgossum officinale were inspected according to Chinese Pharmacopoeia 2010 version (Vol Ⅰ) of appendix ⅹ A. ResultsThe origin′s identification of Cynolgossum officinale were described, and the TLC identification method was formulated with thiacyclohexane- ethyl ether-ethyl acetate(40∶11∶5) as developing solvent, temporarily formulating moisture was not over 15%, the total ashes was 18%, acid-insoluble ashes was 1.5%. Determined the method of ethanol-soluble extract of Cynolgossum officinale and the ethanol-soluble extract product was not less than 18.00%. ConclusionThe Cynolgossum officinale quality control standard can be used to evaluate the quality of Cynolgossum officinale.

　　Key words： Cynolgossum officinale; quality specification; TLC

　　倒提壶来源于紫草科植物药用琉璃草(Cynoglossum officinale L.)的全草。本品在新疆地区资源较丰富，民间应用广泛。据《维吾尔药志》记载，倒提壶性平、清热解毒、降压清脑。用于头痛头晕、高血压、记忆力差、痰喘咳嗽、神经衰弱等症[1]。本品虽已收载于《新疆药用植物志》[2]、《新疆中草药》[3]、《新疆植物志》[4]、《中国植物志》[5]等多种书籍，但目前尚无药材质量标准，很难保证其在临床使用中的安全性和有效性。为此，本文对倒提壶药材的质量标准进行研究，并建立其质量标准草案。

　　1仪器与试药

　　Waters2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)，AG135电子分析天平(梅特勒托利多仪器有限公司)，SK3300LH超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，DirectQTM5超纯水仪(Millipore公司)，YOKOZS紫外线分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司)，YOKODF薄层电动涂敷器(武汉药科新技术开发公司)，ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。β谷甾醇对照品(购自中国生物制品检定所，批号为110851200504)，其它试剂均为分析纯。倒提壶样品分别于2007～2008年采自新疆乌鲁木齐市燕儿窝、乌拉泊、南山、奇台等地，经新疆医科大学附属中医医院中药鉴定室李永和主任药师鉴定均为紫草科植物药用琉璃草(Cynoglossum officinale L.)的全草。

　　2方法与结果

　　2.1形态特征倒提壶药材为紫草科植物药用琉璃草(Cynoglossum officinale L.)的全草。新疆地区与药用琉璃草同属植物还有大果琉璃草(C. divaricatum Steph. exLehm.)、大萼琉璃草(C. macrocalycinum Riedl.)、绿花琉璃草(C. viridifiortun Pall. exLehm)，相近的植物还有紫草科长柱琉璃草属植物长柱琉璃草[Lindelofia stylosa(Kar. et Kir.) Brand.]和长蕊琉璃草属植物长蕊琉璃草(Solenanthus circinnatus Ldb.)，各植物形态特征的主要区别见表1，药用琉璃草的形态特征较易与相近种属植物区分[4]。表1与倒提壶药材来源相近种属植物形态特征的区分茎茎直立，中空，具肋棱，由上部分枝，分枝开展，被向下贴伏的柔毛茎单一，直立，粗壮，具肋棱，由上部分枝，分枝斜升茎五分枝，伸展或略被反卷毛茎具肋棱，有毛茎有贴伏的短柔毛，上部通常分枝茎直立，基部有残存叶柄围成的鞘，通常不分枝，疏生短柔毛叶基生叶和茎下部叶长7～15 cm，宽2～4 cm，上下面均密生贴伏的短柔毛;茎中部及上部叶无柄基生叶具柄，茎生叶无柄，排列紧密，长5～15 cm，宽1～5 cm，上面具长柔毛，下面密生短柔毛，仅具1条中脉茎下部叶柄不明显，中部叶无柄，长13～14 cm，宽3～3.5 cm，被长短不齐的卷曲毛基生叶及茎下部叶，长15～25 cm，宽7～9 cm，上面无毛，下面密生短柔毛;茎中部叶具短柄;茎上部叶渐小无柄基生叶长可达35 cm，两面疏生短伏毛，基部叶柄扁，有狭翅，几无毛;下部茎生叶有柄;中部以上茎生叶无柄或近无柄基生叶有长柄，叶片长5～8 cm，宽3～6 cm，两面疏生短伏毛，叶柄长6～10 cm;茎生叶无柄，基部渐狭并稍下延花序/苞片/花梗顶生及腋生，长约10 cm，花稀疏，集为疏松的圆锥状花序;苞片狭披针形或线形;花梗细弱，长3～10 mm，花后伸长，果期伸长2～4 cm，下弯，密被贴伏柔毛顶生及腋生，具多花，排列紧密呈头状，直径1～2 cm，花后伸长呈总状，长可达15 cm;花梗长5～10 mm，密生短柔毛，果期伸长，长1.5～2 cm花序短，先端大，无苞片;花梗开花时长1 cm，果期长3 cm，密被白色柔毛顶生及腋生，集为圆锥状，无苞片;花梗长1.5～3 mm，密生白柔毛，花后增大，长1 cm，下弯花序初时长3～7 cm，果期伸长可达20 cm，花序轴、花梗、花萼部密生贴伏短柔毛;花梗长2.5～4 mm，果期伸长可达3 cm花序显著呈蝎尾状，多数，腋生，在结果时长可达7 cm，于茎上部再集成圆锥状花序，花序轴、花梗、花萼都密生短柔毛;花无苞片，花梗长1.2 mm花萼长2～3 mm，外面密生短柔毛，裂片卵形或卵状披针形，果几不等大，向下反折长4～6 mm，宽2～4 mm，裂片卵状长圆形或卵状披针形，稀卵形，外面密生灰色短柔毛，内面无毛，果期增大，长可达1.5 cm，宽1 cm花期长8～9 mm，裂片基部离生，边缘覆瓦状重叠，卵形或卵状长圆形，花期后伸长1～1.5 cm，长度、宽度各异，宽度范围2.5～5 mm长2.5～4 mm，外面被贴伏的短柔毛，裂片长圆状线形裂片钻状线形，稍不等大，长5～6 mm长4.5～5.5 mm，5裂至近基部，裂片线形，半开展花冠蓝紫色，长约3 mm，檐部直径3～5 mm，深裂至下1/3，裂片卵圆形，先端微凹，喉部有5个梯形附属物，附属物长约0.5 mm蓝紫色、紫红色、暗紫红色，漏斗状，长5～7 mm，裂片圆形，具网脉，喉部附属物梯形，长约1.5 mm暗紫色，钟状，宽9～9.5 mm，筒部长约5 mm，和檐部等长，喉部附属物大，近方形黄绿色，长4.5～5.5 mm，基部直径l～1.5 mm，檐部直径5～6 mm，裂片圆形，喉部附属物梯形，肥厚，长约1.5 mm，宽约1 mm紫色或紫红色，长8～11 mm，无毛，筒部直，与萼近等长，檐部裂片线状倒卵形，长3.5～4.5 mm，近直伸，附属物鳞片状，无毛宽筒状，紫红色，长约6 mm，无毛，檐部具5个齿状裂片，裂片近开展，先端微2裂，附属物在花冠中部之下，舌状花药/花丝/花柱花药卵球形，长约0.6 mm，着生花冠筒中部之上;花柱肥厚，扁平花药长圆形，长约1 mm;花丝极短;花柱长约3 mm，肥厚花柱短，隐于花冠中，花期后子房不膨大花药长圆形，与附属物近等长;花丝极短，着生花冠筒中部;花柱短粗，长约1.5 mm，直径0.8 mm花药线状长圆形，长约3 mm，先端具2小尖头;花丝丝形，长约2 mm，子房4裂，花柱长1.2～1.5 cm，通常稍弯曲，基部稍有毛，柱头头状，细小花药雄蕊着生附属物之上，花药短长圆形，长约1 mm，两端钝;花丝稍不等长，均远伸出于花冠外，花柱长约8 mm，外伸，无毛，结果时残存并稍弯曲，柱头微小

　　2.2薄层色谱鉴别对供试品前处理方法和展开剂进行反复试验后，确定本品薄层色谱鉴别方法为：取本品粉末2 g，捣碎，加三氯甲烷20 ml，超声提取15 min，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷1 ml 使溶解，作为供试品溶液。另取β谷甾醇对照品，加三氯甲烷制成每1 ml含2 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液5 μl、对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶乙醚∶乙酸乙酯(40∶11∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，检测不同产地的2个批号倒提壶药材供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，β谷甾醇Rf值为0.38，对照药材和供试药材共有4个主斑点，斑点均可对应一致，经实验验证重现性好，结果见图1。图1倒提壶的薄层色谱图1: β谷甾醇对照品; 2: 倒提壶对照药材; 3、4: 2个批号倒提壶样品

　　2.3检查和浸出物

　　2.3.1检查水分测定法、总灰分测定法、酸不溶性灰分测定参照《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅸ H和附录Ⅸ K[6]。根据测定结果，暂定5批倒提壶药材水分不得过15%，总灰分不得过18%，酸不溶性灰分不得过1.5%(表2)。

　　2.3.2浸出物测定预试验分别参照《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅹ A[6]，采用水溶性浸出物热浸法和冷浸法以及75%醇溶性浸出物热浸法和冷浸法测定，结果水溶性浸出物测定中药液过滤困难，以75%醇溶性浸出物热浸法结果重现性较好，故采用此法进行浸出物测定。根据检测结果，暂定倒提壶药材浸出物不得少于18.00%(表2)。表2水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物定量测定结果

　　3讨论

　　3.1倒提壶含有生物碱类成分天芥菜品(倒提壶碱、海蓼苏品)、天芥菜定、天芥菜碱、毛果天芥菜碱等[1]。由于中国生物制品检定所未提供上述成分的对照品，所以本试验先采用经鉴定为正品的原植物对照药材为对照，分别采用以下条件进行实验：(1)取本品粉末2 g，加浓氨试液2 ml与苯20 ml，放置过夜，滤过，取滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml 使溶解，作为供试品溶液，以乙酸乙酯∶甲醇∶浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂，结果供试品色谱斑点显色不清晰。(2)取本品粉末2 g，加乙醇20 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加稀盐酸10 ml，搅拌使溶解，滤过，滤液用40%氢氧化钠溶液调节pH值至10以上，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液，以苯∶乙酸乙酯∶二乙胺(15∶10∶2)为展开剂，结果供试品色谱中，斑点显色仍不清晰。故又选择倒提壶的另一成分β谷甾醇为对照品，再次调整供试品前处理方法：(3)取本品粉末2 g共4份，捣碎，分别加乙醇20 ml，超声提取15 min、30 min和回流提取15 min、30 min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 ml 使溶解，作为供试品溶液。(4) 取本品粉末2 g共4份，捣碎，分别加三氯甲烷20 ml，超声提取15 min、30 min和回流提取15 min、30 min，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷1 ml 使溶解，作为供试品溶液。经试验，按(4)法制备供试品溶液进行薄层色谱鉴别试验效果较好。又因药用琉璃草含有的天芥菜品属于叔胺型生物碱，其碱性仅次于季胺碱，又对展开系统的研究：分别以(1)石油醚(30～60℃)∶乙酸乙酯∶甲醇(20∶5∶1);(2)环己烷∶乙醚∶乙酸乙酯(40∶11∶5)为展开剂，经试验结果表明，以(2)展开系统展开，薄层斑点清晰，分离好。最终确定了倒提壶药材的薄层色谱方法，结果表明采用此法鉴别倒提壶中β谷甾醇和对照药材操作简便，专属性强，主斑点清晰，分离度高，为倒提壶的鉴别提供了一种准确、有效的新方法。

　　3.2经测定5批倒提壶药材的总灰分(生理性灰分)最高可达16.35%，较一般全草类植物高(大多全草类植物多在10%以下)[6]，可能与本品果实有较多锚状刺有关，因此倒提壶药材的总灰分反映了该科属植物的生理特性，可作为该药材质量控制指标。

　　总之，通过实验研究暂定了倒提壶药材质量控制指标的标准值，制订了质量标准草案，该质量标准可用于评价倒提壶药材的质量，为倒提壶药材资源的开发利用提供了科学依据。

【参考文献】
  　　[1]刘勇民.维吾尔药志[M].上册.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999:446451.

　　[2]中国科学院新疆生物土壤沙漠研究所.新疆药用植物志(第二册)[M].乌鲁木齐：新疆人民出版社，1981：124.

　　[3]新疆卫生局.新疆中草药[M].乌鲁木齐：新疆人民出版社，1975:69.

　　[4]新疆植物志编辑委员会.新疆植物志(第四分册)[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，2004:206.

　　[5]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第64卷)[M].北京：科学出版社，1991:157.

　　[6]国家药典委员会.中国药典[S].第一部.北京：化学工业出版社，2010：附录ⅥB，ⅨH，ⅨK，ⅩA.