质量效应3哨兵:黄芪多糖三种提取工艺比较--《黑龙江医药科学》--医学期刊频道--首席医学网

【摘要】  目的：优选黄芪多糖提取的最佳工艺。方法：分别用水提取大孔树脂分离法、水提醇沉法、超声提取法提取多糖，比较三种工艺提取黄芪多糖提取率，并采用分光光度法测定黄芪多糖含量。结果：水提取大孔树脂分离法的黄芪多糖提取率为4.186%，含量为26.19%;水提醇沉法的黄芪多糖提取率为4.468%,含量为29.40%;超声提取法的黄芪多糖提取率为3.420%，含量为30.95%。结论：水提醇沉法是黄芪多糖提取率及含量比较理想的方法。
【关键词】  黄芪多糖;大孔树脂分离法;水提醇沉法;超声提取法
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.monghlicus(Bge.)Hsiao.或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。黄芪多糖是黄芪有效成分之一，能促进T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的功能，可双向调节血糖，延缓细胞衰老，对心血管系统、肝脏、肾脏等具有保护作用。目前黄芪多糖主要出口国外，国内需求量也很大，具有广阔的发展前景[1，2]。本实验对比大孔树脂分离、水提醇沉、超声提取三种方法，筛选黄芪多糖的最佳提取工艺。
1 仪器、材料与试剂
1.1 仪器
电子天平(FA2004N，上海恒平科学仪器有限公司)，紫外可见分光光度计(Spectrukgab54，上海棱光技术有限公司)，超声波清洗器(KQ-500E型，昆山市超声仪器有限公司)，超速离心机(LXJ-ⅡB型，上海安亭科学仪器厂)，循环水式多用真空泵(SHB-Ⅲ，郑州长城科工货有限公司)。
1.2 材料
黄芪(Radix Astragali Bunge) 产地：内蒙古,购于佳木斯金天药店。D101型大孔吸附树脂，购于天津市汇达化工有限公司。薄层色谱硅胶预制板(SG100X50，烟台市化学工业研究所)。
1.3 试剂
蒸馏水(实验室自制)，氢氧化钠(分析纯，哈尔滨市新达化工厂)，95%乙醇(分析纯，沈阳市华东试剂厂)，盐酸(分析纯，哈尔滨市新达化工厂)，邻苯二甲酸苯胺(分析纯，天津市瑞金特化学品有限公司)。
2 方法
2.1 黄芪多糖的提取分离
2.1.1 水提取大孔树脂分离法
称取黄芪饮片50g，加入8倍量水浸泡12h，回流提取2h，滤出溶液，药材再加入5倍量的水回流提取2h，弃去滤渣合并滤液，浓缩得到浓缩液50mL，浓缩液过滤，上大孔吸附树脂柱分离，用水洗脱，收集洗脱液，浓缩至50mL，调醇度为75%，室温静置12h，抽滤，真空干燥，即得多糖。
2.1.2 水提醇沉法
称取黄芪饮片50g，加入8倍量水浸泡12h，回流提取2h，滤出溶液，药材再加入5倍量的水回流提取2h，弃去滤渣合并滤液，浓缩得到浓缩液50mL，浓缩液上超速离心机，分离过滤的滤液浓缩至50mL。调醇度为75%，室温静置12h，抽滤，真空干燥，即得多糖。
2.1.3 超声提取法
称取黄芪饮片50g，加入5倍量95%的乙醇，超声提取脱脂30min，滤出溶液，药材再加入3倍量95%乙醇超声30min。将脱脂后的药材按“2.1.2”的方法得多糖。
2.2 黄芪多糖的含量测定
2.2.1 5%苯酚溶液的配制
精密称取苯酚50g，加铝片0.1g，碳酸氢钠0.05g，用加热套加热蒸溜，收集182℃馏分，冷却，称取5.0g稀释至100mL，摇匀后，装入棕色试剂瓶中备用。2.2.2 标准液的配制
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖10mg于100mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀得标准液。
2.2.3 样品配制
分别取三种方法提取多糖各10mg用水溶解后过滤定容于100mL容量瓶中。
2.2.4 标准曲线的制备
精密量取标准储备液1，2，3，4，5，6，8，10mL分别置于10mL容量瓶中定容，取稀释液1.0mL于10mL具塞试管中，加入苯酚1.0mL摇匀，迅速加入浓硫酸5mL，震荡混匀。置于沸水浴中加热30min，取出，冷却至室温。另取1.0mL水同法配成空白参比液，在490nm处测定吸光度A，以吸光度A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标，得回归方程为y=0.042x-0.041(r=0.9992)。
2.2.5 稳定性实验
取供试液1mL按“2.2.4”项方法操作，每隔30min测定一次，连续3h考察其稳定性，结果RSD为0.27%。
2.2.6 精密度实验
分别取同一试液按“2.2.4”项方法操作，测定吸光度，结果RSD为0.33%(n=5)
2.2.7 样品含量测定
精密吸取供试品溶液2mL，按“2.2.4”项方法分别测定吸光度。结果计算：多糖含量(%)=(C·D)/V×100式中：C-供试液葡萄糖浓度(mg/mL);D-试液的稀释因素;V-供试液体积(mL)。多糖含量：水提取大孔树脂分离法为26.19%;水提醇沉法为29.40%;超声提取法30.95%。
3 实验结果
黄芪多糖三种工艺提取结果见表1。表1 黄芪多糖三种工艺提取结果
药材质量(g) 多糖提取含量(g) 提取率(%) 多糖/粉末(%) 多糖/药材(g)
大孔树脂提取法
50 2.0934 4.186 26.19  0.5483
水提醇沉法 50 2.2341 4.468 29.40 0.6568
超声提取法 50 1.7103 3.420 30.95 0.5293
提取率=多糖提取量/药材质量 多糖/药材（g）=多糖提取量*多糖/粉末（%）
4 讨论
本实验中，超声提取在三种方法中得到多糖含量最少，但纯度最高;水提醇沉法在纯度上仅次于超声提取法，但多糖含量最多，由此可以看出水提醇沉法是黄芪多糖提取率及含量比较理想的方法。
提取率一般有两种计算方法：
1、提取所得浸膏重*其中所测成分的含量/原料的质量
2、提取所得浸膏重*其中所测成分的含量/原料中所测成分的质量（其中原料中所测成分的质量是在对原料进行充分提取后测出的）
而对原料的充分提取可能在工艺上并不是最理想，最可取的，因为时间成本不允许。所以需要优化工艺，即在最短的时间里，尽可能地将所测成分提取出，而不是将所测成分全部地提取出。而在测定原料中所测成分的含量时，并不涉及到时间成本问题，只是要得到一个近乎于真值的数据。
以上两种计算方法都可以，1更简单一些。但2更有参考价值。
此外，提取率不可能大于100%，大于100%的是加样回收率。
同意3楼的说法。补充一点：
1、提取所得浸膏重*其中所测成分的含量/原料的质量，这个计算公式多用于评价提取工艺，即在不知道原料中所测成分的真实含量下，可以用这种公式计算的提取率比较各工艺的优劣。
2、提取所得浸膏重*其中所测成分的含量/原料中所测成分的质量（其中原料中所测成分的质量是在对原料进行充分提取后测出的），这种提取率反应的是提取工艺对原料中所测成分完全提取的能力，有点回收率的意思，此提取率值可以大于100%，用的不是很多。