进击机器人战争破解版:柚肉黄酮降脂作用研究

                 夏晓凯¹ ，童希琼² ，张庭廷² ，陈传平²

（1、       湖南中医药高等专科学校，  湖南 株洲 412012；

 2、  安徽师范大学生命科学学院  安徽 芜湖 241000 ）

【摘要】目的：探讨柚肉黄酮的降脂作用。方法：1. 试验性高血脂模型法  将40只昆明种小鼠随机分成5组，对照组、高脂饲料组(模型组)、不同含量柚肉黄酮＋高脂饲料组（柚肉黄酮小、中、大剂量组）。2. 测定柚肉黄酮对血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量以及动脉硬化指数(AI)的影响。2. 离体胆固醇微胶粒形成实验。结果：1. 柚肉黄酮明显降低喂以高脂饲料小鼠血清TG、TC、HDL－C、LDL－C含量以及AI水平，提高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量，且作用与柚肉黄酮剂量呈正相关。2. 柚肉黄酮体外实验有轻度抑制胆固醇微胶粒形成的作用。结论：柚肉黄酮有显著的降血脂效应，其机理可能与其减少肠道胆固醇的吸收相关。

【关键词】 柚肉黄酮； 血脂； 胆固醇微胶粒

胡柚（植物学名Citrus Paradisi, 英文名Grapefruit）又名金柚,属芸香科, 柑橘属, 是人们喜爱的水果之一。据报道天然柚子能显著降低血脂，帮助减肥；能降低血清低密度脂蛋白的水平, 减少动脉壁的损坏程度, 预防冠心病的发生^{[1, 2, 3, 4, 5, ]}。柚子的这些功能到底与其什么生理活性物质有关，其机理如何？本文就柚肉中的主要活性成分之一—柚肉黄酮(Grapefruit flavonoids  FG)进行提取，并测定其在降血脂等方面的作用及机理，为柚子及其产品的开发利用提供理论依据。

1实验材料与仪器：

1.1 材料与试剂

胡柚：购自芜湖水果市场。

试剂：胆固醇（北京化学试剂公司生产），胆固醇、甘油三酯以及高密度脂蛋白测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，其余试剂皆为分析纯。

1.2 主要仪器

752型紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂）； 日立全自动生化分析仪；组织匀浆捣碎机（JJ-2 2003-61）、旋转蒸发仪（RE-52C 上海青浦仪器厂）；循环水式真空泵（SHZ-DⅢ 予华牌 巩义市英峪予华仪器厂）；恒流泵（HL-2 上海沪西分析仪器厂）。

1.3 实验动物

昆明种小白鼠，bw（20±2）g, 雌雄兼并，购于皖南医学院动物实验中心。动物基础饲料：购于皖南医学院动物实验中心。高脂饲料配方：在基础饲料中加入3%胆固醇，30%猪脂肪油^[6]。

1.4  实验方法 

1.4.1柚肉黄酮的提取和测定

胡柚洗净去皮，制成匀浆，匀浆经抽滤得柚渣A和滤液B两部分，滤液减压浓缩后与柚渣混合，用70%乙醇回流提取4小时后再抽滤得滤液B1与柚渣A1，柚渣A1用90%乙醇在50℃下进一步回流提取两小时，抽滤得滤液B2，将B1、B2一起减压浓缩得黄酮粗提液；粗提液上XAD₄大孔树脂柱，用水洗至水呈无色后用70%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得黄酮精制液，经真空干燥得柚肉黄酮成品。

以硝酸铝－亚硝酸钠为显色剂，芦丁为对照品，测得黄酮纯度为24.3％。

1.4.2 试验性高血脂模型法^[6，7]

昆明种小鼠40只, 经1周适应性喂养后，禁食12 h ，尾尖取血测定总胆固醇含量，根据胆固醇水平分为5 组，每组8只。分别为对照组、高脂饲料组(模型组) 、高脂饲料+不同剂量柚肉黄酮组(柚肉黄酮小、中、大剂量组)。ig给药，A、B组每天ig蒸馏水，柚肉黄酮小剂量组(GFs)、中剂量组GFm)、大剂量组(GFl)分别ig 0.6、0.8和1.0 mg/kg.d 的柚肉黄酮液。实验期间自由饮水和进食，连续10天。末次给药后，所有动物禁食18 h，断头取血，血液在3 200 r/min 条件下，离心10 min，分离血清，经全自动生化分析仪测定TC、TG、HDL-C含量，每组3 个平行， LDL-C 由Friedwald WT 公式^[8] LDL-C ＝ TC－(1/5 TG + HDL-C)算出，动脉硬化指数(Arteriosclerosis index AI)由公式^[7]AI ＝(TC－HDL-C)/ HDL-C算出。

1.4.3离体胆固醇微胶粒形成实验

   在6组10mL离心管内分别加入0.06 mL 新鲜猪胆汁，除第一组作为胆汁空白管外，其余5组分别加入2.5 mg 胆固醇，其中四组再分别加入0.1、0.2、0.3、0.4 mg的柚肉黄酮,余按照文献^[9]操作。

1.2.4 数据处理：实验所得数据经EXCEL 软件处理, 组间采用双侧t检验。

2  结果

2.1  柚肉黄酮对试验性高血脂模型小鼠的作用，见表1。

表1  柚肉黄酮对试验性高血脂模型小鼠的作用（ ± s, n=8）

Table 1  GF preventive effect on experimental mice hyperlipemia （ ± s, n=8）

组别

  GF含量

(mg/kg·d)

TC含量

（mmol/L）

HDL-C含量

（mmol/L）

LDL-C含量

（mmol/L）

HDL-C/TC

TG含量

(mmol/L)

AI

control

—

2.19±0.21

1.15±0.04

0.86±0.31

0.53±0.17

0.88±0.13

1.04

model

—

8.74±0.53^a

0.97±0.42^e

7.50±0.19^a

0.08±0.64^b

2.15±0.17^b

7.34^a

GFs

0.6

5.86±1.12 ^bd

1.37±0.38^de

4.21±0.37 ^ad

0.23±0.36^d

1.32±0.17^d

4.49^bd

GFm

0.8

5.15±0.87^bc

1.38±0.18 ^de

3.57±0.60 ^bc

0.27±0.11^d

1.02±0.18^c

3.77^bc

GFl

1.0

4.67±0.47^bc

1.42±0.26 ^de

3.08±0.35 ^bc

0.30±0.13 ^d

0.84±0.10 ^c

3.25^ec

注：与对照组相比  a: P＜0.001 、b: P＜0.01;  e: P＜0.05

与模型组相比  c: P＜0.01、d: P＜0.05

由表1可见，与对照组相比，模型组：TC含量 P＜0.001以及TG含量 P＜0.01 ，说明造模成功；而给予柚肉黄酮的各组TC、TG含量与模型组比较有显著性降低；分别为P＜0.01和P＜0.05，具有显著性意义；HDL－C的含量与模型组比较，P＜0.05，且随柚肉黄酮的含量增加而增加；具有剂量依赖性；LDL－C的含量则相反随着柚肉黄酮的含量升高而降低，柚肉黄酮组的HDL－C/TC较模型组有显著性升高，AI较模型组有显著的降低，说明柚肉黄酮的确有很好的降脂效果。

2.2      柚肉黄酮对离体胆固醇微胶粒形成的影响，见表2。

               表2  柚肉黄酮对离体胆固醇微胶粒形成的影响

                 Table 2  GF external inhibition on forming TC cemented particle

组 别

TC 微胶粒 (mg)

抑制力 (%)

TC 

 GF(mg)＋TC

0.86

0.10

0.51

56.97

0.20

0.42

67.44

0.30

0.35

75.58

0.40

0.27

84.88

         注:抑制率 (%)＝（1－含柚肉黄酮和TC试管中微胶粒的含量/TC试管中微胶粒的含量）× 100%

结果表明，当反应系统中只有胆固醇和胆汁存在时，有0.86mg的胆固醇微胶粒形成，悬浮在上清液中与未形成微胶粒胆固醇分离开。如果在反应系统中加入不同剂量柚肉黄酮时可以看到各管有不同程度地抑制胆固醇微胶粒的形成，说明柚肉黄酮能降低血脂的一个重要机制可能是减少了肠道对胆固醇的吸收。

3  讨论

目前心血管系统疾病是一种对人类健康威胁最大的疾病,全世界每年由于心血管系统疾病所造成的病人死亡,在各种死亡原因中居于首位,而其中约有四分之三的病人死于动脉粥样硬化及其并发症。目前已经公认高脂血症是促进动脉粥样硬化和危及人类健康的冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）的主要危险因素之一，而降低血脂，可以降低冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生率。据统计资料显示，每降低总胆固醇水平1%，可以降低2%的心肌梗塞的发生率。另外，血脂的降低已被证实可以减慢已形成的粥样硬化斑块的进展，甚至使其消退，并有可能减低冠状动脉粥样硬化性心脏病的病死率^[14,15]。

本实验发现柚肉黄酮对试验性高脂血症小鼠的TC、TG、LDL－C均有降低作用，而对HDL－C有升高作用。同时，还发现柚肉黄酮在体外可抑制胆固醇微胶粒的形成。由此，不难看出柚肉黄酮有显著的降血脂效应，其机理可能是促进了脂肪的代谢以及脂蛋白之间的转化，另外也与其部分抑制了肠道胆固醇的吸收有关。可以断定，柚肉黄酮可能是柚子能降血脂的主要活性成分。对柚肉黄酮的开发在治疗高脂血症、预防动脉粥样硬化、冠心病等方面是具有广阔的应用前景的。

参考文献：

[1]  顾海昌.吃柚子为何能防心脏病.中国食品.2000，21.

[2]  Kurowska, E.M.; Borradaile, N.; Meade, M.et al.Cholesterol-lowering effects of dietary citrus juices and their flavonoids. Studies in rats, mice and rabbits. Atherosclerosis.1997, 134(1-2):330.

[3]  Kurowska, E.M.; Borradaile, N.M.; Spence, J.D.et al. Hypocholesterolemic Effects of Dietary Citrus Juices in Rabbits. Nutrition Research. 2000, 20(1): 121-129.

[4] Tirillini, Bruno. Grapefruit: the last decade acquisitions. Fitoterapia. 2000,71( S1):29-S37.

[5]  Vanamala, Jairam. Reddivari, Lavanya.Yoo, Kil Sun.et al. Variation in the content

of bioactive flavonoids in different brands of orange and grapefruit juices. Journal of Food Composition & Analysis. 2006,19:157-166.

[6]  张庭廷，聂刘旺，吴宝军等.金樱子多糖的抑脂作用[J].中国公共卫生.2004,20(7):829-830

[7] 张庭廷，夏晓凯，陈传平等. 黄精多糖的生物活性研究[J].中国实验方剂学.2006,12(7):42-45.

[8]　Friedwald WT. Estimation of Conantration of Low Density Lipoprotein Cholesterol in

Plasma without Use of the Reparative Ultracentrifuge[J].Chin chen,1992,18:499.

[9] 张庭廷,  童希琼,  刘锡云.大蒜素抑脂作用及其机理研究[J].中国实验方剂学.13(2):32-35.

STUDIES ON INHIBITION OF SERUM LIPIDS BY GRAPEFRUIT FLAVONOIDS

【Abstract】 Objective: To research the inhibition of serum lipids by grapefruit flavonoids  (FG). Methods: 1.establishing experiment mice hyperlipidmia model: 40 mice were divided into five groups and fed with different diets: basal diet (control gruop), high lipids diet (model group ), high lipids and different doses GF supplemented diet (small、medium and large group of GF).  2. The experiment in forming cemented particle of cholesterol in vitro. Results: 1. GF has obvious effective in reducing hyperlipemia mice serum the contents of TG、TC、HDL-C and LDL-C as well as arteriosclerosis index.  2. GF can inhibit the cemented particle of cholesterol formed in vitro. Conclusion: GF has obvious ability to decrease the blood lipids,one of the mechanism of reducing blood lipids perhaps is cholesterol absorb been inhibited.

【Key words】 GF; blood lipids; cemented particle of cholesterol