钢铁雄心4罗马帝国阵营:牛磺酸对异位性皮炎患者Th1/Th2细胞的作用及其机制研究

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寻常型白癜风患者Th1、Th2及Th17部分相关细胞因子的研究

时间:2011-03-28 11:41来源:未知 作者:admin 点击:次

白癜风是一种原发的、局限性或泛发性皮肤色素脱失症,是由于皮肤和毛囊的黑素细胞的酪氨酸酶系统的功能减退、丧失而引起的。白癜风可能是由于遗传素质和免疫因素联合作用所致的一种皮肤病,确切发病机制尚未完全阐明,最近研究表明:细胞免疫状态的改变、自身免

        白癜风是一种原发的、局限性或泛发性皮肤色素脱失症,是由于皮肤和毛囊的黑素细胞的酪氨酸酶系统的功能减退、丧失而引起的。白癜风可能是由于遗传素质和免疫因素联合作用所致的一种皮肤病,确切发病机制尚未完全阐明,最近研究表明:细胞免疫状态的改变、自身免疫和细胞因子在白癜风发病过程中起着重要的作用。 目前认为初始CD4+辅助T细胞可分为4种细胞亚群,分别是Th1、Th2、Th17和调节T细胞(Tregs)。

        免疫系统可分为天然免疫和适应性免疫两大部分,天然免疫系统可对外来的细菌、病毒及肿瘤细胞提供快速、非特异性的免疫效应。此外,天然免疫对决定适应性免疫应答的强度上也起着重要作用。天然免疫系统由抗原递呈细胞(APC)、单核巨噬细胞、树突状细胞(DCs)和NK细胞组成,而适应性免疫由辅助T淋巴细胞亚群组成,它可分为Th1和Th2,这两类免疫系统共同参与调节体内的免疫应答。Th1细胞主要分泌γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子.-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-12等细胞因子,主要介导细胞免疫;Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等细胞因子,主要介导体液免疫。正常情况下Th1/Th2处于相对平衡状态,不同疾病可引起Th1/Th2漂移,而Th1/Th2漂移又反过来影响疾病本身的进展。Th17细胞是-类新的CD4+T细胞亚群,这类细胞除了能特异性的分泌IL-17A和IL-17F,它还能产生IL-6、IL-1β、IL-22等细胞因子。上述这些细胞因子均有强大的致炎效应,在类风湿性关节炎、银屑病、炎症性肠病中Th17细胞均发挥着重要作用,除此之外,过敏性疾病和哮喘的发病也与Th17细胞密切相关。

      Th17细胞作为新的CD4+T效应T细胞亚群,具有独立的分化和发育机制,转化生长因子-β(TGF-β)和IL-6联合作用促进其分化,IL-23促进其增殖和存活,Th1和Th2细胞因子及IL-27则抑制其分化。孤独受体(RORγt)是控制其分化的转录因子。Th17细胞特异地产生的IL-17、IL-22等效应因子,主要介导炎症反应、自身免疫性疾病等的发生和发展。IL-12和IL-23共享IL-12p40亚单位,为证明IL-23在疾病中的作用,人们比较IL-12p35和IL-23p19亚单位基因敲除小鼠与自身免疫性疾病发生的关系,当IL-12p35基因敲除后,对自身免疫性疾病的发生无明显影响,而当IL-23p19基因敲除后,自身免疫性疾病的发生率明显降低,疾病的严重程度也明显减轻,同时Th17细胞减少,IL-17水平下降。调节T细胞为抑制性T细胞,是某些组成性表达CD25的CD4+T细胞。此类细胞可抑制性调节CD4+或CD8+T细胞活化与增殖,在免疫应答中发挥调节作用。

       目前认为,CD4+CD25+调节T细胞来源于胸腺,也可由成熟的CD4+CD25调节T细胞在外周淋巴组织中接触特异性抗原,或在免疫抑制因子作用下活化而形成,它具有免疫无能性和免疫抑制性两大特征,它可通过细胞之间直接接触的方式抑制其它效应性免疫细胞的功能,是迄今为止发现的最重要的免疫抑制细胞。 目的: 白癜风的发病与免疫机制密切相关,既往有学者对白癜风患者Th1和Th2细胞因子进行了研究,但结果并不一致,而对Th17细胞因子的研究,目前未见报道,故本研究从CD4+T细胞的三个细胞亚群Th1、Th2和Th17相关细胞因子入手进行分析,探讨寻常型白癜风患者的免疫状态及部分相关细胞因子在白癜风发病中的作用。

方法: 1.选取44例寻常型白癜风患者及40例健康对照,抽取外周血,分离血清采用ELISA方法检测白癜风患者和正常对照组外周血中IFN-γ、IL-10和IL-17的水平。 

       2.分离外周血中的单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法对上述研究对象外周血单个核细胞的IL-17mRNA的相对含量进行检测。 

       3.统计分析:用SPSS13.0统计软件对所有试验数据进行统计分析,不同分期的寻常型白癜风患者之间以及不同临床类型的寻常型白癜风患者之间IFN-γ、IL-10、IL-17及IL-17mRNA水平的比较采用One-Way-ANOVA进行分析,计量资料采用均数±标准差表示,若方差齐,两两之间比较采用LSD法,若方差不齐,则采用近似F检验Welch法,两两比较则采用Dunnttt's T3法,各细胞因子的水平与疾病病程的相关性检验采用Pearson相关分析,均采用双侧检验,检验水准为α=0.05。

结果:1. IFN-γ在不同分期、不同类型的患者之间均无显著性差异(F=1.568,1.950;P=0.215,0.110),与疾病的病程也无相关性(r=0.083,P=0.242)。 

        2.IL-10在不同分期、不同类型的白癜风患者中有显著性差异(F=38.884,17.906;P=0.000),基于方差分析的多种比较表明,IL-10在进展期显著高于稳定期,稳定期显著高于正常对照组。泛发性白癜风患者IL-10的水平显著高于正常对照组(P0.05),而局限性白癜风IL-10的水平与正常对照组相比无显著性差异(P0.05)。IL-10的水平与疾病的病程无相关性(r=0.090,P=0.126)。

       3.IL-17在不同分期、不同类型的白癜风患者中有显著性差异(F=27.487,13.698;P=0.000),基于方差分析的多种比较表明,IL-17在进展期显著高于稳定期,稳定期显著高于正常对照组。泛发性白癜风患者IL-17的水平显著高于正常对照组(P0.05),而局限性白癜风IL-17的水平与正常对照组相比无显著性差异(P0.05),IL-17的水平与疾病的病程无相关性(r=0.215,P=0.276)。

       4. IL-17mRNA在不同分期、不同类型的白癜风患者中有显著性差异(F=22.284,15.342;P=0.000),基于方差分析的多种比较表明,IL-17mRNA在进展期显著高于稳定期,稳定期显著高于正常对照组。泛发性白癜风患者IL-17mRNA的水平显著高于正常对照组(P0.05),而局限性白癜风IL-17mRNA的水平与正常对照组相比无显著性差异(P0.05)。IL-17mRNA的水平与疾病的病程无相关性(r=0.145,P=0.365)。

结论: 1 Th2型细胞因子IL-10在寻常型白癜风患者中显著高于正常对照组,且进展期显著高于稳定期,泛发性高于正常对照组,但正常对照组与局限性比较,无显著性差异,表明Th1/Th2在寻常型泛发性白癜风患者中存在失衡,Th2细胞因子水平占优势,IL-10可能参与了寻常型泛发性白癜风的发病过程,并与疾病进展有关。
 
            2 Th17型细胞因子IL-17及IL-17mRNA的水平在寻常型白癜风患者中显著高于正常对照组,且进展期显著高于稳定期,泛发性高于正常对照组,但正常对照组与局限性比较,无显著性差异,表明IL-17可能参与了寻常型泛发性白癜风的发病过程,并与疾病进展有关。

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《天津中医学院》 2005年

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牛磺酸对异位性皮炎患者Th1/Th2细胞的作用及其机制研究

阳忠辉  

【摘要】:目的: 异位性皮炎多在儿童期发病,目前在治疗上尚有一定的困难,牛磺酸为儿童期必需的氨基酸,本研究通过检测异位性皮炎患者、健康人群血清中牛磺酸水平,探讨人体血清牛磺酸水平与异位性皮炎发病的关系;通过检测牛磺酸对异位性皮炎患者Th1/Th2细胞因子的作用,探讨牛磺酸治疗异位性皮炎的作用机理。 方法: 1、应用高效液相色谱法(HPLC)检测异位性皮炎患者及正常人群(各30例)血清中牛磺酸水平。回收率为96%-97%。 2、临床资料收集:初诊的异位性皮炎患者(符合Williams诊断标准)及正常对照者。其中异位性皮炎患者48例,健康对照42名(含前面病例数)。 3、应用MTT法观察牛磺酸对异位性皮炎患者PBMC增殖活性的影响。 4、外周血淋巴细胞的培养:用等密度梯度离心法分离外周血单一核细胞,用10%FCS-1640培养液悬浮,24孔培养板体外培养AD患者、健康人PBMC,实验组加入牛磺酸,同时设对照组,两组均加入PHA,终浓度为40μg/ml,置5%CO_2,37℃培养箱中培养48小时。 5、细胞因子的收集和ELISA检测:收集培养细胞上清液,储存于-70℃冰箱集中检测。应用ELISA法检测培养上清液中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的水平。操作方法按试剂盒说明书提供的步骤进行。 5、统计学处理:实验数据用SPSS10.0处理,用t检验、方差分析进行组间比较。 结果: 1、血清牛磺酸水平的检测:AD患者血清中牛磺酸的含量(6.25±0.79μg/ml),显著低于正常对照组(10.32±0.65μg/ml),具有显著的统计学意义(P0.01)。2、牛磺酸在对异位性皮炎患者PBMC的增殖作用有剂量效应趋势,低浓度促进增殖,高浓度抑制增殖,在浓度为40mmol/1是促增殖作用最明显。3、培养上清液中细胞因子的检测结果:(1)IL-2的水平:AD病人PHA组为655.67±610.15pg/ml,牛磺酸组为1410.97±378.31pg/ml,两者具有显著的统计学差异:健康人PHA组为309.54±145.917pg/ml,牛磺酸组为670.77±614.21pg/ml。(2)IL-4的水平:AD病人PHA组为38.66±26.85pg/ml,牛磺酸组为52.30±32.52 pg/ml;

【关键词】:异位性皮炎 牛磺酸 IL-4 IFN-γ ELISA
【学位授予单位】:天津中医学院