九乡新闻网:血浆凝血酶原时间测定
来源：百度文库 编辑：九乡新闻网 时间：2024/04/30 08:14:41
血浆凝血酶原时间测定
血浆凝血酶原时间测定(prothrombin time，PT)，是在体外模拟外源性凝血途径的全部条件，测定血浆凝固所需的时间，用以反映外源凝血途径有关因子是否异常，是筛检凝血功能最基本，最常用的试验之一。
1．原理
在抗凝血浆中，加入足够量的组织凝血活酶(组织因子，TF)和适量的钙离子，即可满足外源凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需要的时间即称为血浆凝血酶原时间。 PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子V、Ⅶ、X的水平。
2．试剂
(1)抗凝剂：109 mmol／L枸橼酸钠液(相当于含2个分子结晶水的枸橼酸钠32 g／L)。
(2)凝血活酶试剂：市售商品，应标有ISI、批号及有效期。冻干者应按说明书指定的溶液复溶。
(3)氯化钙(CaCl2)溶液：浓度为25 mmol／L(目前大部分商品试剂已将凝血活酶、缓冲液与氯化钙液事先混合好，可不必另配 CaCl2液)。
(4)质控物(正常及异常对照血浆)：有商品供应。
3．仪器
(1)手工法：秒表，保持36．5～38．5℃的恒温水浴箱。
(2)仪器法：各种自动或半自动凝血仪，严格按各自的说明书操作。仪器法依测定原理主要有三种：光学法即比浊法、电流法即钩方法和黏度法即磁珠法。
4．血液标本的采集、运送及贮存
(1)用一次性塑料采血器或硅化玻璃注射器，采静脉血液。采血技术要熟练，不可过多损伤血管及周围组织，致使组织液混入血液中。采血时止血带不可束缚过紧，并不应超过2分钟。针筒内见到回血即应解开止血带，否则某些凝血及纤溶因子会活化，并可使血细胞比容(Hct)升高。
(2)静脉采血1．8 ml，加入含有109 mmol／L枸橼酸钠溶0．2 ml的试管中，充分混匀。最好用已加有定量枸橼酸钠液的专用硅化真空采血管采血，以保证血与枸橼酸钠液比例准确，防止凝血因子活化，并保持清洁，防止不洁的试管和不合格橡皮塞的污染。
(3)贮血应用清洁塑料管或硅化玻璃管或其他不沾湿的容器，避免接触活化凝血因子。取得血液后应尽快送到血液检验室。在运送中应避免剧烈振动和日光直射。一般要求自采血到测定不得超过4小时，不可久贮。如在室温中贮存过久，V因子会破坏；另一方面，在4℃贮存过久，会导致第Ⅶ因子活化。实验室在取得血样后应尽快分离血浆并尽快测定。血液如发现凝固，应弃去不用。
5．标本制备
PT和AFTT试验都必须用乏血小板血浆(PPP)，以3 000转／分钟，离心30分钟。用浊度法测定终点的自动化凝血仪，溶血和较明显的黄疸及脂血均会影响测定结果，此时可改用手工法或电子机械式(非比浊法)凝血仪测定。
6．测定步骤
(1)手工法
①按上述方法制备乏血小板血浆。
②将氯化钙凝血活酶溶液，健康人混合冻于血浆和待测血浆，置37％水浴中预温5分钟。
③取试管2支，分别加入待测血浆、健康人混合冻干血浆0．1 ml，37℃水浴预温30秒，再加入预温的25 mmol／L氯化钙凝血活酶溶液0．2 ml，混匀，开动秒表计时。
④不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时，终止计时，记录所需时间。重复以上测定2～3次，取其平均值。
⑤健康人混合冻干血浆的测定值应在11～13秒范围，待测血浆PT值取2～3次的平均值报告。
(2)仪器法：凝血测定仪一般均供应配套试剂，备有详细说明书，应严格按说明书操作。
7．注意事项
(1)整个操作所用器具应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器皿。
(2)采血要顺利，抗凝要充分，采血后应仔细检查标本有无溶血，黄疸和凝血块，任何微小的凝块都会影响测定结果，必须重新采血。
(3)采血后宜在1小时内完成测定，4℃冰箱内保存不应超过4小时。
(4)水浴温度要控制在(37．0±0．5)℃，温度过高或过低都可影响测定结果。
(5)血细胞比容(Hct)<0．2或>0．5时，抗凝剂的用量应做适当的调整，抗凝剂(ml)=(100-Hct)×血液(ml) ×0．00185。
(6)由于每次使用的氯化钙凝血活酶活性不尽相同，测定的条件也有变动，故每次测定均需有正常对照，氯化钙凝血活酶必须注明国际敏感指数(ISI)。
8．报告格式和参考值
(1)以直接测定的时间(PT)报告：参考值PT为11～13秒，超过正常对照3秒有意义。
(2)以PT比值(PTR)报告：PTR=待测血浆的PT／健康人混合冻干血浆的PT。参考值PTR为0．85～1．15。
(3)以国际标准化比值(INR)报告：INR=PTRISI(ISI为氯化钙凝血活酶试剂国际敏感指数)；参考值INR：0．8～1．5。由于PT和PTR测定值存在的偏差较大，对临床上指导口服抗凝药物治疗用量有一定危险性，因此在报告PT、PTR时，一定要报告INR。
(4)凝血酶原时间活动度(PTA)：即先以不同稀释度的血浆制成校正曲线，然后从曲线上读取。参考值为PTA≥80％。
9．临床意义
(1)PT延长：PT超过正常对照3秒以上或凝血酶原比值超过正常范围即为延长，主要见于：①先天性因子Ⅱ、V、Ⅶ、X减少及纤维蛋白原的缺乏(低或无纤维蛋白血症)；②获得性凝血因子缺乏，如DIC、原发性纤溶亢进症、肝病、阻塞性黄疸、维生素K缺乏、血循环中抗凝物质增多等。
(2)PT缩短：①先天性因子V增多；②DIC早期(高凝状态)；③口服避孕药、其他血栓前状态及血栓性疾病(凝血因子和血小板活性增高，血管损伤等)。
(转自：中国期刊网 孙晓春 李 娟）
血浆凝血酶原时间测定(prothrombin time，PT)，是在体外模拟外源性凝血途径的全部条件，测定血浆凝固所需的时间，用以反映外源凝血途径有关因子是否异常，是筛检凝血功能最基本，最常用的试验之一。
1．原理
在抗凝血浆中，加入足够量的组织凝血活酶(组织因子，TF)和适量的钙离子，即可满足外源凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需要的时间即称为血浆凝血酶原时间。 PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子V、Ⅶ、X的水平。
2．试剂
(1)抗凝剂：109 mmol／L枸橼酸钠液(相当于含2个分子结晶水的枸橼酸钠32 g／L)。
(2)凝血活酶试剂：市售商品，应标有ISI、批号及有效期。冻干者应按说明书指定的溶液复溶。
(3)氯化钙(CaCl2)溶液：浓度为25 mmol／L(目前大部分商品试剂已将凝血活酶、缓冲液与氯化钙液事先混合好，可不必另配 CaCl2液)。
(4)质控物(正常及异常对照血浆)：有商品供应。
3．仪器
(1)手工法：秒表，保持36．5～38．5℃的恒温水浴箱。
(2)仪器法：各种自动或半自动凝血仪，严格按各自的说明书操作。仪器法依测定原理主要有三种：光学法即比浊法、电流法即钩方法和黏度法即磁珠法。
4．血液标本的采集、运送及贮存
(1)用一次性塑料采血器或硅化玻璃注射器，采静脉血液。采血技术要熟练，不可过多损伤血管及周围组织，致使组织液混入血液中。采血时止血带不可束缚过紧，并不应超过2分钟。针筒内见到回血即应解开止血带，否则某些凝血及纤溶因子会活化，并可使血细胞比容(Hct)升高。
(2)静脉采血1．8 ml，加入含有109 mmol／L枸橼酸钠溶0．2 ml的试管中，充分混匀。最好用已加有定量枸橼酸钠液的专用硅化真空采血管采血，以保证血与枸橼酸钠液比例准确，防止凝血因子活化，并保持清洁，防止不洁的试管和不合格橡皮塞的污染。
(3)贮血应用清洁塑料管或硅化玻璃管或其他不沾湿的容器，避免接触活化凝血因子。取得血液后应尽快送到血液检验室。在运送中应避免剧烈振动和日光直射。一般要求自采血到测定不得超过4小时，不可久贮。如在室温中贮存过久，V因子会破坏；另一方面，在4℃贮存过久，会导致第Ⅶ因子活化。实验室在取得血样后应尽快分离血浆并尽快测定。血液如发现凝固，应弃去不用。
5．标本制备
PT和AFTT试验都必须用乏血小板血浆(PPP)，以3 000转／分钟，离心30分钟。用浊度法测定终点的自动化凝血仪，溶血和较明显的黄疸及脂血均会影响测定结果，此时可改用手工法或电子机械式(非比浊法)凝血仪测定。
6．测定步骤
(1)手工法
①按上述方法制备乏血小板血浆。
②将氯化钙凝血活酶溶液，健康人混合冻于血浆和待测血浆，置37％水浴中预温5分钟。
③取试管2支，分别加入待测血浆、健康人混合冻干血浆0．1 ml，37℃水浴预温30秒，再加入预温的25 mmol／L氯化钙凝血活酶溶液0．2 ml，混匀，开动秒表计时。
④不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时，终止计时，记录所需时间。重复以上测定2～3次，取其平均值。
⑤健康人混合冻干血浆的测定值应在11～13秒范围，待测血浆PT值取2～3次的平均值报告。
(2)仪器法：凝血测定仪一般均供应配套试剂，备有详细说明书，应严格按说明书操作。
7．注意事项
(1)整个操作所用器具应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器皿。
(2)采血要顺利，抗凝要充分，采血后应仔细检查标本有无溶血，黄疸和凝血块，任何微小的凝块都会影响测定结果，必须重新采血。
(3)采血后宜在1小时内完成测定，4℃冰箱内保存不应超过4小时。
(4)水浴温度要控制在(37．0±0．5)℃，温度过高或过低都可影响测定结果。
(5)血细胞比容(Hct)<0．2或>0．5时，抗凝剂的用量应做适当的调整，抗凝剂(ml)=(100-Hct)×血液(ml) ×0．00185。
(6)由于每次使用的氯化钙凝血活酶活性不尽相同，测定的条件也有变动，故每次测定均需有正常对照，氯化钙凝血活酶必须注明国际敏感指数(ISI)。
8．报告格式和参考值
(1)以直接测定的时间(PT)报告：参考值PT为11～13秒，超过正常对照3秒有意义。
(2)以PT比值(PTR)报告：PTR=待测血浆的PT／健康人混合冻干血浆的PT。参考值PTR为0．85～1．15。
(3)以国际标准化比值(INR)报告：INR=PTRISI(ISI为氯化钙凝血活酶试剂国际敏感指数)；参考值INR：0．8～1．5。由于PT和PTR测定值存在的偏差较大，对临床上指导口服抗凝药物治疗用量有一定危险性，因此在报告PT、PTR时，一定要报告INR。
(4)凝血酶原时间活动度(PTA)：即先以不同稀释度的血浆制成校正曲线，然后从曲线上读取。参考值为PTA≥80％。
9．临床意义
(1)PT延长：PT超过正常对照3秒以上或凝血酶原比值超过正常范围即为延长，主要见于：①先天性因子Ⅱ、V、Ⅶ、X减少及纤维蛋白原的缺乏(低或无纤维蛋白血症)；②获得性凝血因子缺乏，如DIC、原发性纤溶亢进症、肝病、阻塞性黄疸、维生素K缺乏、血循环中抗凝物质增多等。
(2)PT缩短：①先天性因子V增多；②DIC早期(高凝状态)；③口服避孕药、其他血栓前状态及血栓性疾病(凝血因子和血小板活性增高，血管损伤等)。
(转自：中国期刊网 孙晓春 李 娟）