九乡新闻网黄金眸 打脸 小说下载:草莓 花药
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2009第一期
王淑珍郑桂珍
(杭州市农业科学研究院生物技术研究所，浙江杭州 310024)
草莓(Fragaria ananassa,Duch)是蔷薇科草莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一。杭州市草莓生产近年发展很快，栽培面积不断扩大，因此草莓遗传育种的研究显得尤为重要，而花药培养在遗传育种学中的意义重大，这种方法可以有效地缩短育种进程，免去有性后代的世代分离，这对常规育种是一种根本的变革。
目前草莓花药培养获得再生植株报道较多，但普遍存在分化率较低的问题。我们就培养过程中，诸如预处理、表面灭菌、激素对花药培养中脱分化和再分化的影响及光照的作用等方面进行了相关试验研究，初步形成了草莓花药培养的方法。
1 供试材料
农科院自己引育的新品种“红颊”和生产上主栽品种“丰香”。
2 试验方法
2.1 取样
依据单核期花器的形态特征和初步镜检结果来取样，采摘春季草莓花器(单核期花蕾)为接种材料。
2.2 灭菌
经洗衣粉浸泡0．5h及流水冲洗4h后，在无菌条件下表面灭菌方法：75％乙醇30s+0．1％升汞处理10min+无菌水冲洗3次。
2.3 接种
置于超净工作台无菌纸上剥取花药，并接种于培养基上，严格控制将花丝、花冠之类二倍体组织接种进去。
2.4 培养基
诱导培养基筛选：
A：Ms+BAlmg／1+2。4-D O．5mg／1+肌醇100mg／l+水介酪蛋白lOOmg／1+糖50 +琼脂8g／1
B：Ms+2．4一D 0．4+KT0．2+IAA 2．0
C：Ms+BA 1,0+2．4-D 1．0+KT 2．0
D：Ms+BA 2．0+NAA 2．0
E：Ms+BA 2．0+NAA0．2
F：Ms+BA 1．5+NAA0．1
(B-F每升附加蔗糖为50g、琼脂8
G：Ms+BAlmg／1+2，4-D 0．5rag／1+肌醇lOOmg／1+水介酪蛋白lO0mg／1+糖50g／1+琼脂8g，1
分化培养基：采用诱导中的A、E、F培养基。
生根培养基：112 Ms+NAAO．1(附加蔗糖2030g、琼脂8g)。
2.5 培养条件
培养温度为25℃，诱导采用暗培养，其余为光培养，光照时间12h·d-l,光强为2000勒克斯。
3 生长与分化情况
3.1 愈伤的诱导
取单核中晚期的花蕾，流水冲洗4h，置于超净台上用升汞灭菌5h，再用无菌水冲洗5次，剥取花药接种于诱导培养基，于25℃暗培养，培养约3~4周产生
愈伤，观察各个培养基出愈率(图1 o
3.2 分化成苗
挑出清白、致密的愈伤种于分化培养基(A、E、F)上进行光培养，培养l周后愈伤产生绿色分化点，约2 3周可分化出芽。待芽长大后并产生3～4个芽时，转入增植培养基中进行扩繁(图2)。
图1 花药培养愈伤组织
4 结果分析与讨论
4.1 培养材料基因型与发育时期不同基因型的材料，花药诱导率不同，试验中
观察到“红颊”的愈伤组织多为绿色，结构紧密；“丰香”的愈伤组织多为黄褐色，结构松散。花药培养时，花粉在接种时所处的发育时期也许比培养基更为关键，不同作物最适接种的花粉发育时期不一样，试验中观察到草莓花药培养中外植体以花粉处于单核靠边期时最佳，外观花蕾直径约为0．8era左右(图3)。图2 愈伤组织分化成苗 图3 各个时期的花蕾
4.2 外植体的预处理
低温预处理是草莓花培中的一个重要步骤，其作用主要是改善花粉的生理状态，延缓花粉退化，提高内源激素的水平，启动雄核发育，能显著提高花药诱导率。适宜的温度和时间处理可改善小孢子代谢活动，并利于小孢子适应离体后的培养环境，促使大部分的小孢子得以正常生长。处理时间过长，超过小孢子耐受力，导致小孢子受伤，细胞核解体，反而降低了材料的出愈率，影响绿苗分化；处理时间过短，由于母体与离体培养条件相差悬殊，小孢子在生理上不适应，同样也会造成小孢子死亡或发育迟缓。
表不同温度预处理效果比较
从表中可看出： 1)当预处理温度为0℃和5℃时，愈伤组织多为清白紧致形，这种愈伤分化率较
高，而处理温度10℃和15℃的愈伤质量较差； 2)预处理时间对出愈率影响较大。
4.3 意义
草莓花药培养是获得无毒苗的途径之一，其优点是脱毒率高(据报导脱毒效率是100％)、安全可靠。在提高花药培养诱导率的基础上，将花药培养技术与细胞离体筛选、诱变、转基因技术相结合，可在短时间内培育出草莓新品种。特别是以花药培养
单倍体愈伤组织或植株作为转化受体，可以实现外源基因的稳定转化，在草莓转化研究中具有广泛应用前景。
王淑珍郑桂珍
(杭州市农业科学研究院生物技术研究所，浙江杭州 310024)
草莓(Fragaria ananassa,Duch)是蔷薇科草莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一。杭州市草莓生产近年发展很快，栽培面积不断扩大，因此草莓遗传育种的研究显得尤为重要，而花药培养在遗传育种学中的意义重大，这种方法可以有效地缩短育种进程，免去有性后代的世代分离，这对常规育种是一种根本的变革。
目前草莓花药培养获得再生植株报道较多，但普遍存在分化率较低的问题。我们就培养过程中，诸如预处理、表面灭菌、激素对花药培养中脱分化和再分化的影响及光照的作用等方面进行了相关试验研究，初步形成了草莓花药培养的方法。
1 供试材料
农科院自己引育的新品种“红颊”和生产上主栽品种“丰香”。
2 试验方法
2.1 取样
依据单核期花器的形态特征和初步镜检结果来取样，采摘春季草莓花器(单核期花蕾)为接种材料。
2.2 灭菌
经洗衣粉浸泡0．5h及流水冲洗4h后，在无菌条件下表面灭菌方法：75％乙醇30s+0．1％升汞处理10min+无菌水冲洗3次。
2.3 接种
置于超净工作台无菌纸上剥取花药，并接种于培养基上，严格控制将花丝、花冠之类二倍体组织接种进去。
2.4 培养基
诱导培养基筛选：
A：Ms+BAlmg／1+2。4-D O．5mg／1+肌醇100mg／l+水介酪蛋白lOOmg／1+糖50 +琼脂8g／1
B：Ms+2．4一D 0．4+KT0．2+IAA 2．0
C：Ms+BA 1,0+2．4-D 1．0+KT 2．0
D：Ms+BA 2．0+NAA 2．0
E：Ms+BA 2．0+NAA0．2
F：Ms+BA 1．5+NAA0．1
(B-F每升附加蔗糖为50g、琼脂8
G：Ms+BAlmg／1+2，4-D 0．5rag／1+肌醇lOOmg／1+水介酪蛋白lO0mg／1+糖50g／1+琼脂8g，1
分化培养基：采用诱导中的A、E、F培养基。
生根培养基：112 Ms+NAAO．1(附加蔗糖2030g、琼脂8g)。
2.5 培养条件
培养温度为25℃，诱导采用暗培养，其余为光培养，光照时间12h·d-l,光强为2000勒克斯。
3 生长与分化情况
3.1 愈伤的诱导
取单核中晚期的花蕾，流水冲洗4h，置于超净台上用升汞灭菌5h，再用无菌水冲洗5次，剥取花药接种于诱导培养基，于25℃暗培养，培养约3~4周产生
愈伤，观察各个培养基出愈率(图1 o
3.2 分化成苗
挑出清白、致密的愈伤种于分化培养基(A、E、F)上进行光培养，培养l周后愈伤产生绿色分化点，约2 3周可分化出芽。待芽长大后并产生3～4个芽时，转入增植培养基中进行扩繁(图2)。
图1 花药培养愈伤组织
4 结果分析与讨论
4.1 培养材料基因型与发育时期不同基因型的材料，花药诱导率不同，试验中
观察到“红颊”的愈伤组织多为绿色，结构紧密；“丰香”的愈伤组织多为黄褐色，结构松散。花药培养时，花粉在接种时所处的发育时期也许比培养基更为关键，不同作物最适接种的花粉发育时期不一样，试验中观察到草莓花药培养中外植体以花粉处于单核靠边期时最佳，外观花蕾直径约为0．8era左右(图3)。图2 愈伤组织分化成苗 图3 各个时期的花蕾
4.2 外植体的预处理
低温预处理是草莓花培中的一个重要步骤，其作用主要是改善花粉的生理状态，延缓花粉退化，提高内源激素的水平，启动雄核发育，能显著提高花药诱导率。适宜的温度和时间处理可改善小孢子代谢活动，并利于小孢子适应离体后的培养环境，促使大部分的小孢子得以正常生长。处理时间过长，超过小孢子耐受力，导致小孢子受伤，细胞核解体，反而降低了材料的出愈率，影响绿苗分化；处理时间过短，由于母体与离体培养条件相差悬殊，小孢子在生理上不适应，同样也会造成小孢子死亡或发育迟缓。
表不同温度预处理效果比较
从表中可看出： 1)当预处理温度为0℃和5℃时，愈伤组织多为清白紧致形，这种愈伤分化率较
高，而处理温度10℃和15℃的愈伤质量较差； 2)预处理时间对出愈率影响较大。
4.3 意义
草莓花药培养是获得无毒苗的途径之一，其优点是脱毒率高(据报导脱毒效率是100％)、安全可靠。在提高花药培养诱导率的基础上，将花药培养技术与细胞离体筛选、诱变、转基因技术相结合，可在短时间内培育出草莓新品种。特别是以花药培养
单倍体愈伤组织或植株作为转化受体，可以实现外源基因的稳定转化，在草莓转化研究中具有广泛应用前景。