九乡新闻网郑州梵音瑜伽教练培训:人肿瘤坏死因子（TNF）cDNA的分离、鉴定及其表达 - 中国博士学位论文全文数据库
来源：百度文库 编辑：九乡新闻网 时间：2024/05/06 01:07:07
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人肿瘤坏死因子（TNF）cDNA的分离、鉴定及其表达
Isolation, Characterization and Expression of the Complementary DNA for Human Tumor Necrosis Factor (TNF)
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【作者】 肖蕾；
【导师】 吴旻；
【作者基本信息】 中国协和医科大学， 分子生物学， 1989， 博士
【摘要】 肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）是一种由激活的巨噬细胞分泌产生的细胞因子，它最明显的生物特征是可以在体内或体外特异地杀伤肿瘤细胞，而对正常组织细胞无明显毒性作用。人TNF成熟肽分子由157个氨基酸组成，平均分子量为17，000道尔顿；是一个非糖基化、呈中等程度疏水性的蛋白质。近年来的研究发现，TNF除具有抗肿瘤活性外，还具有抗病毒感染，抑制病毒复制的功能；TNF可抑制脂蛋白脂酶活性，促进正常细胞的增殖，刺激骨吸收和抑制骨形成，表明TNF在内毒素介导的败血症休克、细胞的增殖分化和正常的骨重建中都具有重要作用；TNF通过增强多形核中性白细胞的细胞毒和吞噬活性，激活巨噬细胞，诱导产生其他细胞因子（如IL-1，M-CSF，β-IFN），促进组织相容性抗原的表达，以及对淋巴细胞的直接刺激作用等多种途径参与机体的免疫调节，并与多种细胞因子，如IL-1，IL-2及各种干扰素具有协同作用。随着TNF理论研究的不断深入，TNF的应用研究也已进入Ⅰ期和Ⅱ期临床实验阶段。TNF作为一种有希望的抗肿瘤、抗病毒（尤其对AIDS病毒）生物制剂已引起人们的普遍关注。但是，TNF的研究在我国还刚刚开始，由于受到来源的限制，使这一研究无法深入，更不可能将TNF用于临床治疗。为解决这一问题，本工作应用PCR（多聚酶链反应）基因扩增技术，首次在国内分离、克隆了TNF cDNA，并在大肠杆菌中成功地表达了人肿瘤坏死因子，为国内应用基因工程手段大规模生产TNF创造了条件。实验的主要步骤和结果如下所述： 1．用PMA（佛波脂）诱导人前髓细胞性白血病细胞株HL-60，使之表达TNT mRNA。 2．从诱导细胞中分离的Poly（A）+RNA，经逆转录合成cDNA；随后构建了一个具有2.0×105重组子的完整cDNA文库。 3．应用PCR基因扩增技术，以第一链cDNA为模板，分离并克隆了编码人TNF成热多肽所需的全部cDNA顺序（共615bp，包括135bp的3′-非编码序列）。 更多还原
【Abstract】 Tumor necrosis factor （TNF） is a cytokine secreted by activated macrophages. A typical TNF activity has been associated with in vitro and in vivo specific killing of tumor cells, yet has no known effect on normal non-transformed cell lines. Mature human TNF is a non-glycosylated and moderately hydrophobic protein of 157 amino acids, corresponding to. a molecular weight of 17,000 Da.Besides tumoricidal activity, TNF is found to be an antiviral reagent, which can inhibit viral replication and pret... 更多还原
【关键词】 大肠杆菌； 干扰素； 肿瘤； 蛋白质； 基因工程； 质粒； 氨基酸； 内毒素； 编码； 败血症；