身体美白的方法:细胞培养经典的pH值范围
来源:百度文库 编辑:九乡新闻网 时间:2024/04/30 00:54:58
1、细胞培养经典的pH值范围是7 .2~7 .4,可略微偏酸,但不能低于6 .8。我们观察293细胞明显适应酸性环境,pH值在6 .2~6 .3仍能正常生长及繁殖,尤其是在复苏细胞时。若pH值超过7 .4,则细胞难于贴壁,而pH值在6. 9~7 .1时,可顺利贴壁生长,故建议培养293细胞时将pH值调定在此范围内。
2、细胞消化 293细胞的一个生长特性是细胞间易聚集成团。若消化不彻底,则细胞在贴壁生长前即互相粘着成团,细胞易老化且在瓶底分布不均匀。我们的经验是用0 02%EDTA和0 1%胰酶顺次消化,即先加EDTA1ml至50或100ml培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去,再加0 1%胰酶1ml,轻摇使之接触所有细胞后,弃去,将培养瓶置温箱中3~5min,镜下观察细胞变圆,就可终止消化。3、复苏 293细胞的另一生长特性是贴壁所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时,都有不同程度的肿胀,若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%~80%时消化冻存,复苏时将其全部接种至50ml培养瓶中,易造成细胞的拥挤和层叠,使细胞更难贴壁和生长。我们在293细胞复苏时,多次发现上述因细胞过密而不贴壁,进而死亡的情况。而接种至2个50ml瓶中时,未出现上述情况。另外,293细胞复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。我们观察,293细胞对更换培养基非常敏感,加入新鲜培养基后立即观察,可见细胞触角回缩,部分细胞变圆,易浮起,可能因受冷刺激或pH值改变,故我们认为复苏后48小时进行首次更换培养基比较合适,且用一次性塑料培养瓶可增加细胞贴壁牢度。换液前宜将培养基预热。
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