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混合型肝癌的免疫组织化学分析

孙丽萍　周燕　曹敏　陈培辉

　　【摘要】　目的　肝细胞癌、胆管细胞癌以及混合型肝癌三者的病理鉴别诊断有时颇为困难。因此, 分析这些肿瘤的免疫组化标记特点,提供有用的诊断指标。方法　对15 例混合型肝癌进行免疫组化S2P 法观察。结果　15 例混合型肝癌占同期原发性肝癌的3. 39 %。组织学特点同时表现为肝细胞癌和胆管细胞癌,其中有1 例为罕见的碰撞瘤。免疫组化标记,AFP 为10/ 15 例阳性,均表达在肝细胞癌的部位中,而胆管细胞癌均为阴性。细胞角蛋白8 (CK8) 在肝细胞癌成分全阳性,而在胆管细胞癌区域有13 例为阳性,2 例阴性,CK19 在胆管细胞癌成分全阳性,而在肝细胞癌区域也有13 例阳性,其余为阴性。Bcl22 表达阳性率为66. 7 %(10/ 15) 。大部分表达在胆管细胞癌成分,也有5 例在肝细胞癌成分表达阳性。AB/ PAS 黏液染色在胆管细胞癌的成分均为阳性或弱阳性。结论　诊断混合型肝癌主要依据显微镜下的病理特征,结合免疫组化及特殊黏液染色的结果。

【关键词】　混合型肝癌; 诊断; 免疫组织化学

An immunohistochemical study of mixed hepatocarcinoma 　

SUN L iping , ZHOU Yan , CAO Ming , et al . Department of Pathology , the Second A f f iliated Hospital , School of Medicine Zhejiang University , Hangz hou 310009 , China

　　【Abstract】　Objective 　Pathologically , sometimes it is rather difficult to make differential diagnosis a2 mong hepatocellular , cholangiocellular and mixed type of hepatic tumors. The aim of this study was to analyze the immunohistochemical features of mixed type of hepatocarcinoma and to propose some useful diagnostic cri2 teria. Methods 　Fifteen cases of the hepatic tumor were examined by routine histological and immunohisto2 chemical methods with S2P technique. Results 　The mixed type of hepatic tumor accounted for 3. 39 % of all cases of primary hepatocarcinoma in the same period. Histologically , all the mixed type of hepatic tumors re2 vealed some characteristics of hepatocellular and cholangiocellular carcinomas , one of them was collision tumor. Immunohistochemically , 10 cases of the tumor were positive forα2fetal protein(AFP) in the hepatocellular car2 cinoma area , while all 15 tumors were negative for AFP in all cholangiocellular carcinoma areas. Cytokeratin (CK8) was positive in the hepatocellular carcinoma areas of all mixed tumor , whereaspositive in cholangiocel2 lular carcinoma areas of 13 cases ; CK19 was positive in cholangiocellular carcinoma areas of all the tumors , while positive in hepatocellular carcinoma areas of 13 cases. Bcl22 gene product was positive in 66. 7 % of this

tumor , in which it was mainly expressed in cholangiocellular tumor area and in hepatocellular areas of five cas2 es. AB/ PAS stain for mucin was positive in cholangiocellular tumor regions of all the tumors. Conclusions 　Diagnosis of mixed hepatocarcinoma should be made mainly based on combined analysis of the data frompatho2 logical features , immunohistochemical phenotypes and histochemical stain for mucinous material. 　　【Key words】　Mixed type of hepatocarcinoma ; Diagnosis ; Immunohistochemistry

作者单位:310009 　杭州,浙江大学医学院第二医院病理科

　　原发性肝癌中同时具有典型肝细胞癌和胆管细胞癌特征者称为混合型胆管肝细胞癌,较为少见。通常可分为三种类型: (1) 碰撞瘤,为肝细胞癌和胆管细胞癌两者相邻,随生长增大而碰撞融合,此类型相当罕见; (2) 移行型肝癌,同一肿瘤内两种癌瘤同时存在,彼此混杂,并可见移行过渡,此型最常见; (3) 纤维板层样变异,肿瘤的肝细胞成分类似于纤维板层状肝细胞癌,但伴有明显产生黏液的腺管和假腺管区,此病变多趋向发生于年轻非肝硬化患者,血清AFP 水平较低,预后较其他两型为佳,然较典型纤维板层状肝细胞癌为差[1 ] 。为了解混合型肝癌临床病理特点、免疫表型及生物学行为,复习我科近几年肝癌的病例,进行临床病理和免疫组化分析。

材料与方法

本院病理科1996 年～2001 年3 月,诊断原发性肝癌共442 例。其中混合性肝癌15 例( 占3. 39 %) ,复习其临床病理资料,标本经4 %中性甲醛固定,常规石蜡切片,苏木精2伊红染色。所有病例均作AFP、细胞角蛋白8 (CK8) 、CK19 及Bcl22 免疫标记及特殊黏液染色(AB/ PAS) ,免疫组化染色采用S2P 方法,DAB 显色。

所有抗体,S2P 及DAB 试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司,严格按说明书进行操作。用PBS 代替一抗作阴性对照,以已知阳性标本作阳性对照,采用双盲法,肿瘤细胞阳性反应者胞浆和胞膜呈棕褐色。根据阳性细胞所占面积分为四个等级: “ - ”无阳性反应细胞,“ + ”阳性细胞面积< 25 % , “+ + ”阳性细胞面积25 %～75 %之间,“ + + + ”阳

性细胞面积> 75 %。

结　　果

一、临床资料

15 例混合型肝癌患者年龄为28～65 岁,平均年龄51. 5 岁,男10 例,女5 例。病变部位:肿瘤发生在肝右叶13 例,肝左叶2 例。

二、病理资料

1. 大体标本观察:瘤结节的切面大部分为灰白色,亦有灰褐色、土黄色或灰绿色,结节直径2. 0～ 9. 0 cm ,有的肿瘤周围有0. 5～0. 8 cm“卫星结节”, 有的病例切面有多个结节,其中有1 例切面见一个灰白色4. 0 cm ×3. 5 cm 结节,邻近部位见一个土黄色圆形小结节2. 0 cm ×2. 0 cm(碰撞瘤) 。

2. 显微镜下观察:1 例碰撞瘤在镜下可见其中一个结节瘤细胞的胞浆透亮,核圆形或卵圆形,排列成团块状,其间可见血窦,其旁的结节瘤细胞排列成腺管状,腺管中可见分泌黏液,黏液染色阳性,并可见纤维组织间质分隔。大部分病例可见肝细胞癌和胆管细胞癌参杂的图像,瘤细胞呈不同程度的异型, 有的可见瘤巨细胞。

3. 免疫组化标记和特染: 15 例混合型肝癌免疫组化染色结果,见表1 。

表1 　15例混合型肝癌免疫组化阳性结果(例)

AFP AB/ PAS CK8 CK19 Bcl22

肝细胞癌　10 0 15 13 5

胆管细胞癌0 15 13 15 10

讨　　论

混合型肝癌又称“肝细胞胆管细胞混合癌”,肿瘤具有肝细胞癌和胆管细胞癌两种成分和特点,它的组织来源尚无一致意见,有学者指出,最可能是肝细胞癌的一种变异或癌细胞有向肝细胞癌及胆管癌分化增殖的能力[2 ] 。有部分动物实验显示,混合型肝癌的发生以及动物诱癌过程中的复杂现象,提示肝癌细胞可能来源于更为原始的细胞[3 ] 。混合型肝癌的病理学特点则是表现为肝细胞癌和胆管细胞癌两种成分同时存在,其中有1 例为碰撞瘤,一个结节为透明细胞型肝细胞癌图像;另一个结节则表现为胆管细胞癌的特征。其余几例均为二种成分参杂不等,有肝细胞癌为主的(占大部分) ,也有胆管细胞癌为主的。其中另1 例,瘤细胞的排列呈小管状结构为主,有较多的纤维间质,周围有几个“卫星小结节”,瘤细胞则排列呈片状及条索状,细胞梭形,胞浆少,分化差,瘤细胞间有血窦分隔。15 例混合型肝癌中有9 例癌旁肝组织有肝硬化表现。

混合型肝癌的免疫组化标记显示,本组AFP 10/ 15 例阳性,与戴益民等[4 ]报道的40 %～80 %肝细胞中AFP 阳性,AFP 在中等分化( Ⅱ～ Ⅲ级) 的肝细胞癌中明显表达相符。阳性均表达在混合型肝癌中的肝细胞癌成分内,而胆管细胞癌成分均为阴性。CK8 相对分子质量为52. 5 ×103 ,属高相对分子质量B 型细胞角蛋白。15 例肝细胞癌的成分均为阳

性表达( + ～ + + + ) ,而胆管细胞癌的区域仅2 例未表达及弱表达。其余也为阳性表达。CK19 相对分子质量为40 ×103 ,15 例胆管细胞癌的成分也均表达阳性( + ～ + + + ) ,而肝细胞癌的区域也有2 例阴性及弱表达,其余均为阳性表达。有学者报道, Bcl22 可作为肝细胞癌与胆管细胞癌或者转移癌的鉴别标志物,肝细胞癌呈阴性,而胆管细胞癌及转移

性腺癌阳性率分别为100 %与60 %[5 ] 。但本组Bcl22 10/ 15 阳性,阳性表达在混合型肝癌的胆管细胞癌上,而肝细胞癌的区域也有5 例表达阳性。黏液染色AB/ PAS 均为阳性或弱表达,阳性表达在胆管细胞癌的区域,肝细胞癌的区域均为阴性。

综上所述, 要诊断混合型肝癌,主要根据镜下的病理特征,肿瘤细胞的异型性,结合免疫组化及AB/ PAS 的结果。另外,AFP 联合AB/ PAS 也可作为鉴别肝细胞癌和胆管细胞癌的鉴别标记物。

参考文献

1 　Klatskin G, Conn Ho. Histopathology of the liver. 1st ed. New York : Oxford university press , 1993.

2 　路建平,林肇辉,袁胜涛,等. 混合型肝癌的临床病理特点及诊断. 中华肿瘤杂志,1995 ,17 :2082211.

3 　刘复生,刘彤华,主编. 肿瘤病理学. 第1 版. 北京:北京医科大学—中国协和医科大学联合出版社,1997.

4 　戴益民,杨林森,梅峰,等. 肝细胞癌及癌旁组织中AFP 基因表达和其抗原蛋白的细胞定位. 中华医学杂志,1989 ,69 :6252628.

5 　Skopelitou A , Hadjiyannakis M , Alexopoulou V , et al. Topo2 graphical immunohistochemical expression of bcl22 protein in human liver lesions. Anticancer Res , 1996 ,16 :9752978.