采煤机型号选型:质粒提取方法
来源:百度文库 编辑:九乡新闻网 时间:2024/04/27 19:17:05
质粒提取protocol
1.取 1.5 ml 过夜培养(OD1.6左右)细菌培养物于一Eppendorf管中,室温,12000g 离心 30 s(离心条件下同)。去上清,同样方法再次集菌 1.5 ml。最后,离心 15s,吸弃管中微量的培养液。
2.往沉淀中加入 200 μl 溶液Ⅰ,振荡器上剧烈振荡;加入200 μl 溶液 Ⅱ, 轻轻来回颠倒混匀 4-5 次 ,于冰上放置 5 min;加入 200 μl 溶液 Ⅲ,轻轻来回颠倒混匀 4-5 次,冰上放置 5 min。
3.离心 12 min。取上清, 加入0.7倍体积的异丙醇室温沉淀5min,室温离心(别的步骤可以4度离心,但这一步最好室温离心) 4min。吸干、弃上清。
4.用200ul水溶解沉淀,加200ul(等体积)5M 的LiCl洗去蛋白,-20度放置6min。离心,吸上清于另外一新管中。
5.加2倍体积的无水乙醇,室温5min。离心4min,弃上清。
6.500ul70%的乙醇洗涤,用枪头吹起来后,颠倒几次。5min。离心,弃上清。再离心,吸干微量的乙醇。
7.沉淀于超静台吹18min。(最好关闭灯光)
8.溶于双蒸水,约20ul。加1ulRNA酶37度烘箱消化30min,消化时EP管盖子敞开。冻存于-20度。
1.取 1.5 ml 过夜培养(OD1.6左右)细菌培养物于一Eppendorf管中,室温,12000g 离心 30 s(离心条件下同)。去上清,同样方法再次集菌 1.5 ml。最后,离心 15s,吸弃管中微量的培养液。
2.往沉淀中加入 200 μl 溶液Ⅰ,振荡器上剧烈振荡;加入200 μl 溶液 Ⅱ, 轻轻来回颠倒混匀 4-5 次 ,于冰上放置 5 min;加入 200 μl 溶液 Ⅲ,轻轻来回颠倒混匀 4-5 次,冰上放置 5 min。
3.离心 12 min。取上清, 加入0.7倍体积的异丙醇室温沉淀5min,室温离心(别的步骤可以4度离心,但这一步最好室温离心) 4min。吸干、弃上清。
4.用200ul水溶解沉淀,加200ul(等体积)5M 的LiCl洗去蛋白,-20度放置6min。离心,吸上清于另外一新管中。
5.加2倍体积的无水乙醇,室温5min。离心4min,弃上清。
6.500ul70%的乙醇洗涤,用枪头吹起来后,颠倒几次。5min。离心,弃上清。再离心,吸干微量的乙醇。
7.沉淀于超静台吹18min。(最好关闭灯光)
8.溶于双蒸水,约20ul。加1ulRNA酶37度烘箱消化30min,消化时EP管盖子敞开。冻存于-20度。
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