九乡新闻网风过明岚txt下载:His-tag标记的融合蛋白的快速、高特异性、高灵敏度的凝胶染色
来源：百度文库 编辑：九乡新闻网 时间：2024/05/02 20:58:21
His-tag标记的融合蛋白的快速、高特异性、高灵敏度的凝胶染色
nVision? His-tag凝胶染色剂：
* 专门用于His-tag融合蛋白的染色
* 直接在凝胶内显色，无需进行Western印迹
* 只需一个小时就可以完成His-tag融合蛋白的纳克级检测
高度特异性
InVision? 染色剂的高度特异性使您更可信地鉴定His-tag融合蛋白。该染色使用某种荧光染料结合到Ni-NTA复合物上。镍离子与寡聚组氨酸序列之间具有高度亲 和作用，从而可以清楚的观察到您的His-tag标记蛋白。而若采用考马斯亮蓝进行染色，则经常无法在众多内源蛋白中分辨出His-tag蛋白。
高灵敏度检测
这 种可以产生明亮InVision?信号的独特染料，使染色极为灵敏。而且，您不再需要使用一套复杂的成像系统来检测荧光信号。只需配备有一台标准相机的紫 外透射仪，您就可以在最低背景情形下检测到纳克级的His-tag标记蛋白（图1-A）。您也可以使用一台可见光激光扫描仪来检测InVision?染色 结果。
在NuPAGE? NOVEX 4－12％Bis-Tris的凝胶上进行电泳，采用InVision? His-tag凝胶染色剂进行染色来检测重组His-tag标记蛋白（A）。然后使用SimplyBlue? SafeStain染色剂通过考马斯亮蓝染色法对总蛋白进行检测（B）。图中箭头所指为His-tag标记蛋白。
1－3泳道：在BL21大肠杆菌中表达His-LacZ：分别是未诱导，诱导1小时后，诱导2小时后。
4－5泳道：5微升BenchMark? His-tag标记蛋白Marker
5－7泳道：分别将160纳克、80纳克、40纳克分子量为25KDa的纯His-tag标记蛋白混合到BL21大肠杆菌裂解液中
8－10泳道：分别将160纳克、80纳克、40纳克分子量为60KDa的纯His-tag标记蛋白混合到BL21大肠杆菌裂解液中
比Western Blotting更加快速简便
使用InVision?His-tag凝胶染色剂进行的染色及其方便并且只需要很短的实际操作时间。不需要将蛋白转移到膜上，不需要长时间的封闭，孵育及使用抗体。不到三小时就可以观察到His-tag标记融合蛋白条带，与传统的WesternBlotting相比，您将可以节省19小时的时间（图2）。若需加快速度，您还可以选择进行微波炉实验步骤，仅需1个小时就可以完成染色。假如您想查看凝胶内的总蛋白，也可以在对InVision?染色结果记录完成以后再使用总蛋白染色剂对凝胶进行染色（图1B）。
图2－使用InVision? His-tag凝胶染色剂与使用传统Western Blotting检测His-tag标记蛋白的比较
和传统Western Blotting说再见吧，使用InVision? His-tag染色剂可以更有把握、更简单的确定His-tag标记蛋白的表达效果。请马上订购InVision? His-tag凝胶染色剂和BenchMark His-tag标记蛋白标准。