九乡新闻网讨命技能详解:浅谈迁徙状生长细菌最佳分离条件的分析与实践--《西南军医》--医学期刊频道--首席医学网
来源：百度文库 编辑：九乡新闻网 时间：2024/04/26 06:57:25
长期以来，迁徙状生长细菌一直是各级各类医院检验科微生物实验室进行细菌培养、分离、鉴定和药物敏感试验等工作中较为棘手的问题，尤其在迁徙状生长细菌和其它细菌混合生长的情况下，此问题显得特别突出。本实验室在查阅报道文献和相关资料的基础上，对迁徙状生长细菌的最佳分离条件进行了进一步的探讨与实践，与同行探讨。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
用于观察迁徙状生长情况的细菌为普通变形杆菌（编号为A）和铜绿假单胞菌ATCC27853（编号为B），与其进行混合生长的细菌为金黄色葡萄球菌ATCC25923（编号为Ⅰ）、大肠埃希氏菌ATCC25922（编号为Ⅱ）和肠球菌（编号为Ⅲ）。其中，普通变形杆菌和肠球菌由本室自患者标本中分离、纯化、按规保存后获得；金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希氏菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853，均购自卫生部药品检定所。同时，以金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希氏菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853作为每周质控菌株。
1.2 培养基
不同琼脂浓度和不同石碳酸浓度培养基的基本成分均购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所，血培养基用羊血购自昆明医学院相关实验室。不同琼脂浓度和不同石碳酸浓度血培养基由本室自行配制。
1.3 试验方法
1.3.1 接种与培养方法
将上述各种培养的细菌（A、B、Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ）分别进行相应编组（即：A+Ⅰ、A+Ⅱ、A+Ⅲ、 B + Ⅰ、B + Ⅱ、B +Ⅲ和 A + B ），并分别制成接种菌液，其浓度相当于1.5亿(108cfu/ML),浊度相当于麦氏比浊管第一号管的1/2(含0.048M的BaCl2 0.5ml，0.36N H2SO4 99.5ml)，进一步将其稀释为(104cfu/ML)；分别与不同琼脂浓度（2.0%～3.0%、3.5%～4.0%、4.5%～5.0%、5.5%）和不同石碳酸浓度（0.3%～0.1%、0.085%、0.075%、0.050%～0.0125%）的血培养基进行等量混合接种；于35℃孵箱中孵育48h。
1.3.2 分离和鉴定方法
根据是否形成单个菌落、菌落的大小和氧化酶试验的强弱和快慢等，选择最佳分离条件（最佳琼脂浓度和最佳石碳酸浓度），进一步进行分离培养。
2 结果与讨论
2.1 当琼脂浓度和石碳酸浓度分别为2.0%～3.0%和0.050%～0.0125%时，上述各种编组均不形成单个菌落；当琼脂浓度和石碳酸浓度分别为3.5%～4.0%和0.075%时，上述各种编组均形成单个菌落，且对菌落大小、色素形成、细菌生长特征、氧化酶反应时间和强弱均无影响；当琼脂浓度和石碳酸浓度分别为4.5%～5.0%和0.085%时，在上述各种编组中产生“一或两种菌落均较小，细菌生长受到抑制等现象”，即：对菌落大小、色素形成、溶血性状、细菌生长特征、氧化酶试验时间和强弱均产生一定的影响；当琼脂浓度和石碳酸浓度分别为5.5%和0.3%～0.1%时，上述各种编组均为细菌不生长。
2.2 长期以来，对各种细菌的接种、培养、分离和鉴定工作，仅仅局限于重点针对非迁徙状生长细菌，且基本能够满足临床工作的需要。然而，对于迁徙状生长细菌，由于其培养、分离和鉴定工作相对麻烦，在实际工作中，一般仅仅报告为“有迁徙状生长细菌”，或者依据相关的工作经验进行推测和报告。对于其中混合生长的非迁徙状生长细菌和迁徙状生长细菌均难以进行进一步处理，不利于合理用药，导致疾病迁延不愈，影响临床治疗速度和治疗效果。因此，探讨“迁徙状生长细菌的最佳分离条件”显得十分必要，具有较大的试验价值和临床意义。由本次实验结果可见：当琼脂浓度和石碳酸浓度分别为3.5%～4.0%和0.075% 时，血培养基处于最佳分离条件（最佳琼脂浓度和最佳石碳酸浓度），最适宜进行各种细菌的接种、培养、分离和鉴定等工作。此时，细菌形成单个菌落，且菌落的大小和各种生化指标（主要包括色素、溶血性状、氧化酶试验、气味和凝固酶等）均没有改变。
2.3 值得注意的是：本次试验仅仅对细菌浓度为104cfu/ML的迁徙状生长细菌之最佳分离条件进行了分析与实践，而其它浓度细菌的等量混合和非等量混合生长试验之最佳分离条件的分析和实践有待进一步研究和完善。另外，针对迁徙状生长细菌在最佳分离条件下的药物敏感试验也有待进一步研究和完善。